jueves, 12 de junio de 2014

Procedimiento del experimento Avery–MacLeod–McCarty, procedimiento para aislar al agente transformador

Procedimiento del  experimento Avery–MacLeod–McCarty, procedimiento para aislar al agente transformador


Los Pneumococcos se caracterizan por formar colonias lisas como se muestra en la imagen inicial. Al microscopio electrónico demostraban poseer una cápsula de polisacáridos, la cual en el suero de un mamífero induce una fuerte respuesta inmune. La clasificación de los serotipos es realizada gracias a esta respuesta inmune.

El procedimiento de purificación que Avery realizó consistió en matar las bacterias mediante intenso calor y extraer los componentes mediante una solución salina. Esto genera una mezcla de componentes solubles como carbohidratos, proteínas hidrosolubles y ácidos nucleicos, pero excluye a las proteínas liposolubles y a los lípidos.

Posteriormente, las proteínas hidrosolubles fueron precipitadas con cloroformo, y los carbohidratos complejos de las capsulas se hidrolizaron por medio de una enzima. Posteriormente, para evitar reacciones cruzadas con alguna proteína de la capsula se emplearon enzimas específicas para completar su destrucción.

Finalmente, la sustancia activa fue separada de la solución acuosa por medio de fraccionamiento con alcohol que la hace insoluble, lo cual genera fibras blancas-transparentes que pueden ser removidas con facilidad por medios físicos “igual que hilar un hilo”.

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