viernes, 13 de junio de 2014

Procedimiento del experimento Hershey–Chase, marcadores radioactivos

Procedimiento del experimento Hershey–Chase, marcadores radioactivos


Para distinguir entre proteínas y ADN se emplearon el fósforo y el azufre, esto se debe a que las proteínas no contienen fósforo, mientras que el ADN sí; mientras que todas las proteínas contienen azufre. El nitrógeno no era útil ya que ambas sustancias contienen nitrógeno. Los isótopos elegidos fueron el fósforo 32 para marcar al ADN y el azufre 35 para marcar las proteínas.

Incorporar isótopos no se puede realizar de forma manual, para lograrlo se cultivaron bacterias en medios ricos con los isótopos durante unas cuatro horas, de forma tal que sus proteínas y material genético se cargaban con los marcadores. Después de 4 horas, se infectaron estas bacterias con los fagos, de forma tal que estos adquirieron los isótopos marcados en sus propias estructuras.

Este procedimiento fue hecho una vez para los fagos marcados con azufre y una vez para los fagos marcados con fósforo. Posteriormente, la progenie marcada fue extraída del caldo de cultivo y transferida a otro medio con isótopos normales, con bacterias sin marcar.

Cuando un fago ingresa a una bacteria no lo hace de forma completa, una enorme sección se queda por fuera, la cuestión era saber que material era el que ingresaba a la bacteria, pues evidentemente se trataba del material genético del virus.

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